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ELISA試劑盒內(nèi)源性物質(zhì)使用說(shuō)明

 更新時(shí)間:2019-05-21 點(diǎn)擊量:1125
   血清是較為常用的標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,ELISA試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,其中內(nèi)源性物質(zhì)又分為:類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
 ?。?)類(lèi)風(fēng)濕因子
  人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。
       解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);③檢測(cè)抗原時(shí),可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
 ?。?)補(bǔ)體
  ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q可以將二者連接起來(lái),從而造成假陽(yáng)性。
       解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
  (3)嗜異性抗體
  人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái),也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
 ?。?)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體
  人ELISA試劑盒臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。
       解決的辦法是:測(cè)定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig(s),從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
  (5)嗜靶抗原的自身抗體
  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,ELISA試劑盒有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
 ?。?)標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等,均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。
 ?。?)交叉反應(yīng)物質(zhì)
  類(lèi)di高辛、類(lèi)AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí),如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí),也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
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