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        人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

         更新時間:2019-09-18 點(diǎn)擊量:1082

        人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

        本試劑盒僅供研究使用。

        實(shí)驗(yàn)原理

        本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人羰基化蛋白(PC)水平。用純化的人羰基化蛋白(PC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入羰基化蛋白(PC),再與HRP標(biāo)記的羰基化蛋白(PC)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的羰基化蛋白(PC)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人羰基化蛋白(PC)濃度。

        人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

        130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

        2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(16nmol/L)0.5ml×1瓶

        3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶

        4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

        5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

        6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

        標(biāo)本要求

        1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

        人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

        1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

        8nmol/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        4nmol/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        2nmol/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        1nmol/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        0.5nmol/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

        3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

        4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

        6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。

        7.溫育:操作同3。

        8.洗滌:操作同5。

        9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

        10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

        11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

        計(jì)算

        以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

        人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)

        1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

        2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

        3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

        4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

        5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

        6.底物請避光保存。

        7.嚴(yán)格按照人羰基化蛋白(PC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

        8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

        9.本試劑不同批號組分不得混用。

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